在生物醫(yī)學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究中，細(xì)胞培養(yǎng)是一項(xiàng)基礎(chǔ)而核心的技術(shù)。它不僅為科學(xué)家提供了觀察和研究細(xì)胞行為、生理、病理過(guò)程的平臺(tái)，還是藥物研發(fā)、基因治療等領(lǐng)域重要的實(shí)驗(yàn)手段。完整的細(xì)胞培養(yǎng)全流程涉及多個(gè)精心設(shè)計(jì)的步驟，其中，胎牛血清（Fetal Bovine Serum, FBS）作為培養(yǎng)基的關(guān)鍵成分，其選擇和使用對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的成功至關(guān)重要。

一、完整的細(xì)胞培養(yǎng)全流程

1、準(zhǔn)備階段：

設(shè)備清洗與消毒：確保所有用于細(xì)胞培養(yǎng)的器具（如培養(yǎng)皿、移液管、離心管等）干凈無(wú)菌，常通過(guò)高壓蒸汽滅菌或紫外線照射等方法進(jìn)行消毒。

培養(yǎng)基配制：根據(jù)細(xì)胞類型和培養(yǎng)需求，選擇合適的培養(yǎng)基并加入必要的生長(zhǎng)因子、抗生素等添加劑，最后按比例加入胎牛血清。

2、細(xì)胞復(fù)蘇（對(duì)于一開始培養(yǎng)或需要繼續(xù)培養(yǎng)的凍存細(xì)胞）：

將凍存的細(xì)胞從液氮或超低溫冰箱中取出，迅速置于37℃水浴中解凍。

解凍后的細(xì)胞懸液加入含有預(yù)熱培養(yǎng)基的離心管中，輕輕混勻后離心去除凍存液。

用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到培養(yǎng)皿中。

3、細(xì)胞培養(yǎng)：

將接種好的細(xì)胞置于適宜條件（如溫度、濕度、CO?濃度）的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

定期檢查細(xì)胞生長(zhǎng)情況，包括細(xì)胞形態(tài)、密度和培養(yǎng)基顏色等，必要時(shí)進(jìn)行換液或傳代。

、4細(xì)胞傳代：

當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至鋪滿培養(yǎng)皿底部約80%-90%時(shí)，進(jìn)行傳代操作。

移除舊培養(yǎng)基，用無(wú)菌PBS清洗細(xì)胞表面。

加入適量的消化液（如胰蛋白酶），在適宜條件下消化細(xì)胞。

消化完成后，加入含血清的培養(yǎng)基終止消化，并輕輕吹打使細(xì)胞脫壁形成懸液。

將細(xì)胞懸液分裝到新的培養(yǎng)皿中繼續(xù)培養(yǎng)。

5、細(xì)胞凍存：

對(duì)于暫時(shí)不需要培養(yǎng)或需長(zhǎng)期保存的細(xì)胞，可進(jìn)行凍存處理。

使用含有DMSO等冷凍保護(hù)劑的凍存液重懸細(xì)胞，并分裝到凍存管中。

按照一定的降溫程序（如4℃、-20℃、-80℃梯度降溫）將細(xì)胞凍存管轉(zhuǎn)移至液氮罐中長(zhǎng)期保存。

二、對(duì)胎牛血清的要求

胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中常用的天然培養(yǎng)基添加劑之一，它含有多種生長(zhǎng)因子、激素、維生素和其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化起著至關(guān)重要的作用。然而，不同來(lái)源、批次和加工方式的胎牛血清在質(zhì)量上可能存在差異，因此在使用過(guò)程中需要滿足以下要求：

無(wú)菌性：胎牛血清必須是無(wú)菌的，以避免引入微生物污染導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)失敗。

內(nèi)毒素含量低：內(nèi)毒素是細(xì)菌死亡后釋放的有毒物質(zhì)，對(duì)細(xì)胞具有毒性作用。因此，要求胎牛血清中的內(nèi)毒素含量必須控制在極低水平。

營(yíng)養(yǎng)豐富且穩(wěn)定：胎牛血清應(yīng)含有豐富且穩(wěn)定的生長(zhǎng)因子和其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，以支持細(xì)胞的正常生長(zhǎng)和增殖。同時(shí)，不同批次之間的質(zhì)量差異應(yīng)盡可能小。

無(wú)外源因子污染：包括病毒、支原體等外源因子的污染會(huì)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生嚴(yán)重影響。因此，胎牛血清必須通過(guò)嚴(yán)格的檢測(cè)和篩選程序來(lái)確保其無(wú)外源因子污染。

適合細(xì)胞類型：不同細(xì)胞類型對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求可能不同。因此，在選擇胎牛血清時(shí)需要考慮細(xì)胞類型的特異性需求，并選擇與細(xì)胞類型相匹配的血清。

Ausbian進(jìn)口胎牛血清，內(nèi)毒素含量低，≤3EU/ml，通過(guò)各項(xiàng)無(wú)菌檢測(cè)；多批次平行供應(yīng)，滿足各種實(shí)驗(yàn)需求。