人們之前認(rèn)為只有真菌DNA發(fā)生的突變才會(huì)導(dǎo)致對(duì)抗真菌藥物產(chǎn)生抗藥性。目前的診斷技術(shù)依賴(lài)于對(duì)真菌DNA進(jìn)行測(cè)序來(lái)尋找這樣的突變。

在一項(xiàng)新的研究中，來(lái)自英國(guó)愛(ài)丁堡大學(xué)的研究人員發(fā)現(xiàn)真菌可以在不改變它們的DNA---它們的遺傳密碼---的情形下產(chǎn)生抗藥性。相關(guān)研究結(jié)果發(fā)表在2020年9月17日的Nature期刊上，論文標(biāo)題為“Epigenetic gene silencing by heterochromatin primes fungal resistance”。

 

這項(xiàng)新的研究發(fā)現(xiàn)，真菌可以在沒(méi)有基因變化的情況下出現(xiàn)抗藥性。相反，真菌表現(xiàn)出表觀遺傳變化---不影響它們的DNA的變化，這表明真菌抗藥性的許多原因可能在以前被忽略了。

每年真菌疾病影響十億人，據(jù)估計(jì)造成160萬(wàn)人死亡?？顾幮哉婢腥臼且粋€(gè)日益嚴(yán)重的問(wèn)題，特別是在免疫系統(tǒng)較弱的患者中，如HIV感染者。目前有效的抗真菌藥物很少。

過(guò)度使用農(nóng)業(yè)殺真菌劑也導(dǎo)致土壤傳播的真菌的抗藥性增加。真菌疾病每年導(dǎo)致世界上多達(dá)三分之一的糧食作物損失。

在這項(xiàng)新的研究中，這些研究人員通過(guò)使用模擬抗真菌藥物活性的caffeine處理一種稱(chēng)為裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）的酵母菌，觀察到這種酵母菌出現(xiàn)抗藥性。他們發(fā)現(xiàn)由此產(chǎn)生的抗藥性酵母菌在影響它們的DNA組裝方式的特殊化學(xué)標(biāo)簽上發(fā)生了改變。一些基因被包裝在稱(chēng)為異染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)中，它使得基因沉默或失活，換言之，這種表觀遺傳變化導(dǎo)致這種酵母菌產(chǎn)生抗藥性。

這一發(fā)現(xiàn)可能為通過(guò)改進(jìn)現(xiàn)有的表觀遺傳藥物或開(kāi)發(fā)干擾真菌異染色質(zhì)的新藥物來(lái)治療耐藥性真菌感染鋪平道路。

改進(jìn)的殺菌劑處理糧食作物可以限制農(nóng)業(yè)損失，也可以減少環(huán)境中持續(xù)加劇人類(lèi)感染的抗藥性真菌菌株的數(shù)量。

論文通訊作者、愛(ài)丁堡大學(xué)生物科學(xué)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)研究所惠康細(xì)胞生物學(xué)中心的Robin Allshire教授說(shuō)，“這些發(fā)現(xiàn)可能對(duì)理解植物、動(dòng)物和人類(lèi)真菌病原體如何對(duì)非常有限的有效抗真菌藥物治療產(chǎn)生抗藥性產(chǎn)生影響，我們的團(tuán)隊(duì)對(duì)此感到興奮。”

支原體是細(xì)胞外生存的小微生物，是一類(lèi)缺乏細(xì)胞壁的原核細(xì)胞型微生物，大小一般在0.2~0.5um之間，呈高度多形性，有球形、桿形、絲形、分枝狀等多種態(tài)。

1、支原體存在于我們周?chē)赡芫腿鐗m埃一樣存在于我們的環(huán)境中

2、可透過(guò)一般的濾膜，所以不要寄希望于過(guò)濾可以清楚支原體污染的液體

支原體對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的污染發(fā)生率高，據(jù)估計(jì)平均發(fā)生率在60%左右。同時(shí)又非常隱秘，早期不容易被發(fā)現(xiàn)，除非用特異性和靈敏度都非常高的檢測(cè)試劑盒。支原體因?yàn)閭€(gè)頭小，能穿過(guò)0.22微米濾器，并且在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)會(huì)潛在的擴(kuò)散。支原體污染使得用被污染的細(xì)胞樣本做的實(shí)驗(yàn)*失去意義和價(jià)值。

那我們?cè)谧黾?xì)胞培養(yǎng)時(shí)如何檢測(cè)支原體呢？

 

1. 支原體常規(guī)PCR檢測(cè)試劑盒（一步法）

用途說(shuō)明：

1）適合科研單位檢測(cè)，或單位內(nèi)檢，用PCR法檢測(cè)細(xì)胞或其他生物基質(zhì)。

2) 比藥典操作標(biāo)準(zhǔn)合并了一步，（將內(nèi)控對(duì)照試劑預(yù)先混合在PCR mix試劑中），操作更簡(jiǎn)潔。

3)樣本量為2μl，靈敏度為20個(gè)基因組拷貝/反應(yīng)。結(jié)果準(zhǔn)確。

2. 支原體常規(guī)PCR檢測(cè)試劑盒（經(jīng)典法，不含Taq酶）

用途說(shuō)明：

1) 符合歐洲藥典、中國(guó)藥典要求，更適合細(xì)胞治療，CAR-T，抗體藥、疫苗等臨床項(xiàng)目申報(bào)和質(zhì)檢。

2）樣本需先做DNA抽提。抽提后樣本加入量為10μl。

3）試劑盒中不含Taq酶，需另外購(gòu)買(mǎi)。

4) 廠家可協(xié)助完善方法驗(yàn)證步驟。

3. 支原體常規(guī)PCR檢測(cè)試劑盒（經(jīng)典法，含Taq酶）

用途說(shuō)明：

1) 符合歐洲藥典、中國(guó)藥典要求，更適合細(xì)胞治療，CAR-T，抗體藥、疫苗等臨床項(xiàng)目申報(bào)和質(zhì)檢。

2）樣本需先做DNA抽提。抽提后樣本加入量為10μl。

3）試劑盒中含Taq酶，無(wú)需另外購(gòu)買(mǎi)。

4) 廠家可協(xié)助完善方法驗(yàn)證步驟。

4. 支原體常規(guī)PCR檢測(cè)試劑盒（預(yù)分裝法）

用途說(shuō)明：

1）適合科研單位檢測(cè)，或單位內(nèi)檢，用PCR法檢測(cè)細(xì)胞或其他生物基質(zhì)。

2) 比一步法更為方便。表現(xiàn)在：

① PCR組分（包括酶、核苷酸、引物、內(nèi)控對(duì)照，均為凍干粉）和上樣緩沖液/染料已預(yù)先分裝在八連管中。

② PCR結(jié)束后，產(chǎn)物直接上膠，不需再加上樣緩沖液和染料。

3)價(jià)格比一步法略高。適合想節(jié)省時(shí)間、追求簡(jiǎn)易的用戶(hù)。